ISSN 1991-3087
Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100
Яндекс.Метрика

НА ГЛАВНУЮ

Модифицирующее влияние блокатора Н3/Н4-гистаминовых рецепторов имопроксифана на уровень интерлейкиновой продукции в смешанных лимфоцитарных культурах у больных Q-позитивным инфарктом миокарда.

 

Ханферян Роман Авакович,

доктор медицинских наук, профессор, зав. кафедрой Клинической иммунологии, аллергологии и лабораторной диагностики ФПК и ППС,

Оранский Павел Петрович,

соискатель, врач-кардиолог Краевой клинической больницы № 1, г. Краснодар,

ГОУ ВПО Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию Кубанский Государственный Медицинский Университет.

 

Введение.

 

В последнее время наблюдается повышенный интерес исследователей к роли иммунных факторов, и, в частности цитокинов, в развитии инфаркта миокарда (ИМ), являющегося одним из самых прогностически неблагоприятных проявлений ишемической болезни сердца  (Balbay Y. et al., 2001; Al-Ahmad R.S., 2004). Цитокины являются регуляторными пептидами, влияющими на широкий спектр клеточных реакций, развивающихся при иммунном ответе, воспалении, гипоксии и других патологических процессах.  В большинстве публикаций, посвященных активации системы цитокинов при ИБС, основное внимание уделяется изменению сывороточного уровня преимущественно провоспалительных интерлейкинов у больных с различными формами ишемической болезни сердца (ИБС) (Jaremo P. et al., 2000; Koukkunen H. et al., 2001; Закирова А.Н. и соавт., 2005). Показано, что некоторые цитокины способны влиять на различные показатели функционального статуса миокарда – гемодинамические, иммунные, метаболические и др., причем продемонстрированы как кардиодепрессивные, так и, напротив, кардиопротективные их эффекты (Мазуров В.В. и соавт., 1999; Smith D.A. et al., 2001).

Продукция же цитокинов в клеточных культурах при этой патологии исследована явно недостаточно, в то время как именно изучение уровня интерлейкинов в клеточных культурах и определение возможности его медикаментозной модификации могут способствовать разработке принципиально новых подходов к лечению такой распространенной и приводящей к неблагоприятным социальным последствиям патологии, какой является ИБС, и, в частности, инфаркт миокарда.

Гистаминовые Н3-рецепторы были открыты Schwartz et al. (Arrang J.M., 1983) при изучении метаболизма гистамина в центральной нервной системе. Н3 рецепторы преимущественно экспрессируются на гистаминергических нейронах центральной нервной системы, а также эозинофилах и дендритных клетках. Н4-рецепторы, которые по своей структуре более чем наполовину гомологичны Н3-рецепторам,   представлены на различных клетках периферической крови – лейкоцитах, лимфоцитах, дендритных, тучных клетках (Akdis C.A. et al., 2003). Установлено, что экспериментальная активация Н3-рецепторов стенки артериальных сосудов на экспериментальных моделях сердечной недостаточности вызывает отрицательный ино- и хронотропный эффекты (Seyedi N. et al., 1996; Mazenot C. et al., 1999). Работ по изучению системы Н3/Н4 рецепторов у больных ИБС в доступной для нашего анализа мировой литературе практически не представлено.

Известны тесные взаимодействия между системами гистамина и различными цитокинами: так, например, Idzko M. et al. (2002) установлено, что гистамин способен стимулировать выработку ИЛ-10, тормозить выработку ИЛ-12 дендритными клетками, а также является индуктором выработки моноцитами ИЛ-18 и интерферона-гамма. В то же время, необходимо отметить, что литературе практически отсутствуют данные об уровне спонтанной и стимулированной цитокиновой продукции в лимфоцитарных культурах больных острым инфарктом миокарда на фоне экспериментального применения Н3/Н4-антагонистов.

 

Цель исследования.

 

Изучение спонтанной  и стимулированной продукции ИЛ-6 и ИЛ-10 в смешанных лимфоцитарных культурах в исходном состоянии и после добавления H3/H4-антагониста имопроксифана (И).

 

Материалы и методы.

 

Исследование проведено у 14 пациентов с Q-позитивным инфарктом миокарда (9 мужчин, 5 женщин) в возрасте от 52 до 71 года (средний возраст 59,2±8,2 года). Контрольную группу составили 8 относительно здоровых лиц, рандомизированных по полу и возрасту с опытной группой.

Острый Q-позитивный ИМ устанавливался по общепринятым критериям (по клинической картине, ЭКГ, положительному тесту с тропонином I, наличию гиперферментемии).

Забор крови из кубитальной вены производили в первые сутки после развития ИМ (в остром периоде). Концентрация ИЛ-6 и ИЛ-10 в смешанных лимфоцитарных культурах определялась с помощью метода иммуноферментного анализа (иммуноферментный анализатор Anthos 2010) согласно прилагаемым протоколам к наборам реактивов.

Смешанные лимфоцитарные культуры выделялись после центрифугирования в градиенте раствора Ficoll-Hypaque. Затем выдерживался период инкубации в течение 48 часов. На следующем этапе исследования в смешанных культурах лимфоцитов методом иммуноферментного анализа изучалась спонтанная и стимулированная конканавалином А, трансформирующим фактором роста β1 продукция ИЛ-6 и ИЛ-10 без присутствия имопроксифана и при добавлении различных его концентраций.

Результаты обработаны с использованием пакета статистических программ Statistica 6.0. Данные представлены в виде медиана (25; 75 процентили). Различия между группами оценены с помощью критериев Манна-Уитни и Вилкоксона, значимыми различия считали при значении р<0,05.

 

Результаты.

 

Согласно поставленной цели исследования, нами проведено изучение спонтанной и стимулированной конканавалином А, трансформирующим фактором роста β1 продукции ИЛ-6 и ИЛ-10 в смешанных лимфоцитарных культурах сыворотки больных в остром периоде ИМ. Данные по изучению продукции провоспалительного цитокина ИЛ-6 в лимфоцитарных культурах представлены в таблице 1.

 

Таблица 1.

Продукция интерлейкина-6 в смешанных лимфоцитарных культурах больных с острым Q-позитивным инфарктом миокарда на фоне различных стимуляторов и при добавлении Н3/Н4 антагониста имопроксифана.

Стимулятор секреции

 

Контрольная группа

(n=8)

Без И

(n=14)

И,

10-5 г/мл

(n=14)

И,

10-6 г/мл

(n=14)

Спонтанная секреция

4,2

(1,4;

7,3)

10,3

(4,4; 12,1)

4,1

(1,3;

7,4) *

7,9

(3,3;

8,1)

Конканавалин А

10,2

(6,9;

13,9)

16,4

(10,1; 18,3)

6,8

(2,6;

8,3) *

8,4

(4,3; 10,1)

ТФРβ1

12,3

(5,3;

14,3)

12,4

(8,4; 17,4)

10,9

(5,3;

12,1)

12,2

(7,9; 15,3)

Примечание:

Концентрация ИЛ-6 представлена в пг/мл; И - имопроксифан;

ТФРβ1 – трансформирующий фактор роста β1;

Данные представлены в виде: медиана (25; 75 процентиль);

† - p<0,05 - сравнение c контрольной группой (критерий Манна-Уитни)

* - p<0,05 - сравнение с группой без И (критерий Вилкоксона)

 

Спонтанная продукция ИЛ-6 в исследуемой группе больных с ИМ была повышена более чем двухкратно (p=0,02). При использовании в качестве стимулятора секреции конканавалина А в этой группе отмечен повышенный на 61% уровень продукции ИЛ-6 (р=0,04). При добавлении в культуру имопроксифана в концентрации 10-5 г/мл отмечено значимое уменьшение концентрации ИЛ-6 на 60,2% (p=0,04) с приближением к показателю в контрольной группе, стимулированная конканавалином продукция ИЛ-6 также уменьшалась при использовании препарата в этой же концентрации. При добавлении более низких концентраций Н3/Н4 блокатора нами не зарегистрировано значимого влияния на уровень продукции ИЛ-6. ТФРβ1 не оказывал значимого влияния на культуральную продукцию этого провоспалительного цитокина.

Таким образом, нами установлены повышенные уровни спонтанной и стимулированной конканавалином А продукции ИЛ-6 в группе больных с Q-позитивным ИМ и уменьшение выработки ИЛ-6 в лимфоцитарных культурах на фоне добавления имопроксифана в концентрации 10-5 г/мл.

Во второй части нашего исследования проведено изучение уровня спонтанной и стимулированной секреции ИЛ-10 в смешанных культурах лимфоцитов (данные представлены в табл. 2).

Уровень спонтанной выработки ИЛ-10 не отличался от значения в контрольной группе, показатель стимулированной конканавалином А секреции этого интерлейкина оказался выше на 54% (p=0,04). При изучении влияния имопроксифана на секрецию ИЛ-10 спонтанная его продукция в культурах увеличивалась при использовании концентрации препарата 10-5 г/мл в 2,2 раза (p=0,04), при добавлении концентрации 10-6 г/мл – в 2,6 раза (p=0,03) по сравнению с подгруппой без добавления Н3/Н4 антагониста. На фоне стимуляции конканавалином А и ТФРβ1 изменений в уровне выработки ИЛ-10 по сравнению с подгруппой без применения И не отмечено.

 

Таблица 2.

Уровни продукции ИЛ-10 в смешанных лимфоцитарных культурах больных с острым инфарктом миокарда на фоне различных стимуляторов и при добавлении Н3/Н4 антагониста имопроксифана.

Стимулятор секреции

Контрольная группа

(n=8)

Без И

(n=14)

И,

10-5 г/мл

(n=14)

И,

10-6 г/мл

(n=14)

Спонтанная секреция

6,8

(3,8; 8,3)

8,1

(2,6; 10,2)

18

(15,8; 24,1) *

21,3

(12,4; 21,3) *

Конканавалин А

15,9

(7,4; 20,3)

24,5

(19; 25,4) †

21,4

(18,2; 21,7)

19,8

(19,1; 24,2)

ТФРβ1

10,3

(3,5; 12,1)

7,6

(3,9; 11,7)

9

(8,6; 9,5)

8,6

(5,1; 12,1)

Примечание:

Данные представлены в виде медиана (25; 75 процентиль);

† - p<0,05 - сравнение c контрольной группой (критерий Манна-Уитни)

* - p<0,05 - сравнение с группой без И (критерий Вилкоксона)

Концентрация ИЛ-10 представлена в пг/мл; И - имопроксифан; ТФРβ1 – трансформирующий фактор роста β1;

 

 

Обсуждение.

 

По данным клинико-экспериментальных исследований усиление выработки провоспалительных цитокинов, в частности ИЛ-6, у больных с острым инфарктом миокарда может иметь неблагоприятные клинические последствия в виде увеличения риска осложненного клинического течения (Koukkunen H. et al., 2001; Jaremo P. et al., 2000). В связи с этим, весьма актуальным является поиск фармакологических средств, которые могут потенциально модифицировать баланс про- и противовоспалительных цитокинов при этом заболевании. При исследовании лимфоцитарных культур нами получены новые данные о возможном иммуномодулирующем эффекте имопроксифана, связанном с угнетением продукции ИЛ-6 и увеличением синтеза ИЛ-10, при остром Q-позитивном ИМ, что может иметь прикладное значение при поиске средств для иммунокоррекции при этом заболевании.

 

Выводы.

 

1.                  Спонтанная и стимулированная конканавалином А продукция ИЛ-6 в смешанных лимфоцитарных культурах у больных с Q-позитивным ИМ повышена по сравнению с группой здоровых лиц.

2.                  Установлен иммуномодулирующий эффект имопроксифана in vitro с уменьшением продукции ИЛ-6 и увеличением выработки ИЛ-10 у больных с Q-позитивным ИМ.

 

Литература.

 

1. Закирова А.Н., Мухаметрахимова А.Р., Закирова Н.Э. Состояние систолической функции левого желудочка и активность провоспалительных цитокинов при остром инфаркте миокарда. - Сердечная недостаточность. - 2005. – том 6. - № 4. – С. 162-165.

2. Мазуров В.В., Столов С.В., Линицкая Н.Э. Динамика различных уровней провоспалительных цитокинов в зависимости от различных форм ИБС. -  Клиническая медицина. – 1999. - № 1. – С. 23-27.

3. Akdis C.A., Blaser K. Histamine in the immune regulation of allergic inflammation. – J. Allergy Clin. Imunol. – 2003. – vol. 112.p.15-22.

4. Al-Ahmad R.S., Mahafzah A.M., Al-Mousa E.N.Immunological changes in acute myocardial infarction. - Saudi Med. J. – 2004. -  vol.25(7). – p.923-928.

5. Arrang J.M., Garbarg M., Schwartz J.C. Auto-inhibition of brain histamine release mediated by a novel class (H3) of histamine receptor. - Nature . – 1983. – vol. 302.p.832–837.

6. Balbay Y., Tikiz H., Baptiste R.J., Ayaz S., Sasmaz H., Korkmaz S. Circulating interleukin-1 beta, interleukin-6, tumor necrosis factor-alpha, and soluble ICAM-1 in patients with chronic stable angina and myocardial infarction. – Angiology. – 2001. – vol. 52(2). – p.109-114.

7. Idzko M., la Sala A., Ferrari D., Panther E., Herouy Y., Dichmann S., Mockenhaupt M., Di Virgilio F., Girolomoni G., Norgauer J. Expression and function of histamine receptors in human monocyte-derived dendritic cells. J. Allergy Clin. Immunol.
– 2002. – vol. 109 (5). – p. 839-846.

8. Ishikawa S. , Sperelakis N. A novel class (H3) of histamine receptors on perivascular nerve terminals. – Nature. – 1987. - vol. 327.p.158–160.

9. Itoh H., Takahashi H.K., Iwagaki H. et al. Effect of histamine on intercellular adhesion molecule-1 expression and production of interferon-gamma and interleukin-12 in mixed lymphocyte reaction stimulated with interleukin-18. - Transplantation. – 2002. – vol. 27.p.864-870.
10. Jaremo P., Hansson G., Nilsson O. Elevated inflammatory parameters are associated with lower platelet density in acute myocardial infarctions with ST-elevation. - Thromb. Res. – 2000. – vol. 15 (100). – p. 471-478.
11. Kohka H., Nishibori M., Iwagaki H. et al. Histamine is a potent inducer of IL-18 and IFN-gamma in human peripheral blood mononuclear cells. – J. Immunol. – 2000.- vol.164 (12). – p. 6640-6646.
12. Koukkunen H., Penttila K., Kemppainen A. et al. C-reactive protein, fibrinogen, interleukin-6 and tumour necrosis factor-alpha in the prognostic classification of unstable angina pectoris. - Ann. Med. – 2001. -  vol. 33(1). – p.37-47.

13. Mazenot C., Durand A., Ribuot C. et al. Histamine H3-receptor stimulation is unable to modulate noradrenaline release by the isolated rat heart during ischaemia-reperfusion. – Fundam. Clin. Pharmacol. – 1999. – vol. 13. – p. 455–460.

14. Okamura H., Tsutsui H., Komatsu T. et al. Cloning of a new cytokine that induces IFN-gamma production by T cells. – Nature. – 1995. – vol. 378.p.88-91.

15. Seyedi N., Imamura M., Hatta E. Levi R. Desensitization of histamine H3-receptors in a canine model of pacing-induced heart failure: A cause of increased norepinephrine release .Circulation. – 1996. – 94. – p.406.

16. Smith D.A., Irving S.D., Sheldon J., Cole D., Kaski J.C. Serum levels of the anti-inflammatory cytokine IL-10 are decreased in patients with unstable angina. Circulation. - 2001 104:746–749.

 

Поступила в редакцию 14 декабря 2007 г.

2006-2019 © Журнал научных публикаций аспирантов и докторантов.
Все материалы, размещенные на данном сайте, охраняются авторским правом. При использовании материалов сайта активная ссылка на первоисточник обязательна.