b-талассемии в сочетании с наследственной ферментопенической метгемоглобинемией

 

Эфендиев Ариф Мустафа оглы,

доктор биологических наук, профессор, зав. кафедрой биохимии,

Аскерова Таира Алемшах кызы,

доктор биологических наук, ведущий научный сотрудник,

Мусаев Миршахин Азизага оглы,

аспирант.

Азербайджанский медицинский университет, Баку.

 

В последнее время проводятся интенсивные исследования по изучению нас­­ледственных форм гемолитических анемий, обусловленных нарушением син­те­за глобиновой цепи и образованием различных патологических гемогло­бинов [4, 5].

В данный момент накоплен большой материал, показывающий распрост­ра­не­ние гемоглобинопатий, в основном b-талассемии во многих странах ми­ра, в том числе и в Азербайджанской Республике. Значительный генетический по­­ли­мор­физм b-талассемии обуславливается наличием в одной и той же по­пу­ля­ции разнообразных мутаций b-глобинового гена. Иногда наблюдается со­че­тание b-та­лассемии с НФМ.

Метгемоглобинемии обусловлены повышенным содержанием метгемо­гло­бина (MtHb), неспособного переносить кислород. Выделяют наследственные и приобретенные метгемоглобинемии. К наследственным относят наследствен­ные энзи­мо­пе­нические метгемоглобинемии (НФМ), обусловленные резким сни­жением или пол­ным отсутствием в эритроцитах активности фермента липо­амид-дегидроге­на­за-зависимой метгемоглобинредуктазы, и наследственные, развиваю­щие­ся в ре­зуль­тате наличия нестабильных или аномальных гемогло­би­нов (М-гемо­глоби­нопатии), в которых в результате генных мутаций прои­зош­ла замена ами­нокис­лотных остатков в a- или b-цепях глобина [1-3].

Диагноз таких спорадических случаев, протекающих с различными клини­ческими проявлениями, ставят на основании личного и семейного анамнеза с уче­том этнической принадлежности обследуемого, географических и эпиде­мио­­логи­ческих данных, а также результатов клинико-лабораторных исследо­ва­ний, вклю­чая специальные диагностические тесты.

 

Материалы и методы исследования

 

Количество MtHb и MtHb-R определяли методом изоэлектрофоку­сиро­ва­ния метгемоглобинредуктазы, проводили на при­боре «Мultiphor-2117» фирмы LKB (Щвеция), используя амфолины рН 3,5-10 [6, 7]. Определение MtHb и MetHb-R исследовали также спек­трофотомет­ри­ческим методом [8]. Электро­фо­рети­ческое разделение ге­моглобинов на ацетат-целлюлозных пленках про­во­дили в трис-ЭДТА борат­ном (р-9,0) буфере по Маrенgо-Rove [9]. Для опреде­ле­ния HbF использовали метод Бетке [10].

Для выявления сочетанных форм метгемоглобинемии с b-талассемией об­с­ледовано 48 гомозиготных и 84 гетерозиготных больных с b-талассемией в воз­рас­те от 6 месяцев до 41 лет. Из 48 гомозиготных больных 27 были женс­кого и 21 мужского пола. Среди гетерозиготных больных были 20 мужчин и 64 женщин.

b-Талассемия диагностировалась на основании анамнеза, клинических про­­­яв­лений, определений осмотической резистентности эритроцитов, феталь­ного ге­мо­глобина, гемоглобина А₂ и медико-генетического обследования чле­нов семей пробанда. У всех больных определяли количество MtHb и MetHb-R для выяв­ле­ния метгемоглобинемии.

Картина крови характеризовалась тяжелой гипохромной анемией с выра­жен­ными морфологическими изменениями эритроцитов (анизо- и пойкило­ци­тоз, микроцитоз, мишеневидность, гипохромия). Биохимическая характерис­ти­ка пока­за­телей крови этих больных представлена в таблице 1.

Критерием диагностики для гомозиготной b-талассемии является повы­ше­ние количества фетального гемоглобина. Содержание фетального Hb в этой груп­пе больных 34,3% раза было повышено по сравнению с контрольной груп­пой. Другой диагностический показатель b-талассемии HbA₂ также было дос­товерно повышено на 39,2% (p< 0,001). Изменение количества MtHb и MetHb-R показано в таблице 2 (рис.1).

 

Таблица 1.

Биохимические показатели крови больных с гомозиготной b-талассемией (n=48).

Статистические показатели	Показатели крови
	MtHb,%	MtHb-R, ед.акт.	HbA2,%	HbF,%
М	16,427	4,976	3,384	45,2
M	1,264	0,154	0,331	3,146
Min	9,5	0,6	0,22	11,2
Max	67	5,9	10,5	86,3
P	<0,01	<0,01	<0,05	<0,01

Прим.: p – статистически значимая разница с контрольными показателями вычислена по W-критерию Уайта.

 

Рис. 1. Количество MtHb и MtHb-R у больных с b-талассемией.

 

Уровень MtHb колебался от 9,5% до 67% т.е. в 9,7 раз было выше по срав­нению с контрольной группой (норма 1-2%). Обнаружено достоверное повы­шение активности (p<0,001) MtHb-R на 37,7%, чем в контрольной группе. За больными шло наблюдение в динамике. После 15-ти дневного лечения у них повторно было определено количество MtHb и активность MtHb-R. У больных 6 чел. уровень MtHb остался высоким 16,2 раза выше, а содержание MtHb-R низ­ким. Активность фермента варьировала от 0,6 ед. акт. до 3,5 ед.акт.

 

Таблица 2.

Биохимические показатели крови больных с гомозиготной b-талассемией и метгемоглобинемией (n=6).

Статистические показатели	Показатели крови
	MtHb,%	MtHb-R, ед.акт.	HbA2,%	HbF,%
М	27,383	2,583	3,300	49,517
m	8,675	0,436	0,493	10,509
min	12	0,6	1,8	12,3
max	67	3,5	5,5	86,3
p	<0,01	<0,01	<0,05	<0,01
p2	>0,05	<0,01	-	-
p3	>0,05	<0,01	>0,05	>0,05

Прим.: статистически значимая разница вычислена по W-критерию Уайта:

1.                    p – с контрольными показателями;

2.                    p₂ – с показателями группы с MtHb;

3.                    p₃ – с показателями группы b-талассемия.

 

Анализ полученных результатов подтверждает наличие у этих больных сочетание НФМ с b-талассемией.

 

Рис. 2. Диаграмма показателей HbA₂ и HbF у больных с b-талассемией

и b-талассемия с сочетанием НФМ.

 

На рисунке 2 показаны данные количества HbA₂, HbF у больных с b-талас­семией и сочетанием b-талассемии с НФМ. Надо отметить, что уровень HbA₂ и HbF у больных с только b-талассемией наблюдается высоким, чем в слу­чае со­че­тание b-талассемии с НФМ.

Сравнительная оценка полученных данных показывает, что при b-талас­се­мии до лечения у всех больных выявляется повышенный уровень MtHb, и снижение активности MtHb-R. Но у 42 больных в ходе комплексного лечения b-талассемии улучшение общего состояния больного сопровождается нормали­за­­цией данных показателей.

Семейно-генеалогический анализ родственников подтвердил поставлен­ный диагноз «сочетание НФМ с гомозиготной b-талассемией».

Нами в ходе работы на основании полученных биохимических данных об­следованные были разделены на 3 группы. В I группу (6 чел.) вошли больные с сочетанием b-талассемии с НФМ, во II группу (10 чел.) больные только с НФМ и III группу (48 чел.) больные с диагнозом гомозиготной b-талассемии (рис.2).

Следует отметить, что в 3-х группах у всех обследованных был установ­лен высокий уровень MtHb: в I группе 16,2 раза выше по сравнению с кон­троль­ной группой и достоверное p<0,01 снижение MtHb-R, в II группе количе­ство MtHb было 19,8 раза выше норме, при достоверном снижение (p<0,001) ак­тив­ности MtHb-R и в III группе уровень метHb было 3,7 раза выше норме при досто­верном снижение 1,4 раза (p<0,001) активности MtHb-R.

Данные результаты показывают, что во всех группах уровень MtHb был повышен, наиболее высокий уровень MtHb был во II группе. Но в этих обсле­дован­ных группах установлен низкий уровень активности MtHb-R.

Вышесказанное показывает, что во II группе устойчивое повышение уров­­ня MtHb и снижение или отсутствие активности MtHb-R связано с наслед­ственным носительством метгемоглобинемии.

В периферической крови гетерозиготных больных по b-талассемии (84 человек: 64 женщин и 20 мужчин, возраст больных было от 2 лет до 41 года) час­­­то наблюдали анизо- и пойкилоцитоз, сравнительно редко мишеневидные эрит­­роциты. При этом биохимические показатели крови были следующими: ко­личество HbА₂ – 4,9 ± 0,11%, HbF – 1,93 ± 0,15% (таблица 3.).

По результатам видно, что при гетерозиготной b-талассемии также наб­лю­дается достоверное (p<0,001) повышение количества MtHb в 1,7 раза и (p<0,001) в 1,5 раза активности MtHb-R.

Основываясь на полученных результатах, можно сделать вывод, что при гомозиготном носительстве b-талассемии наблюдается более достоверное по­вы­шение MtHb и снижение MtHb-R, чем при носительстве гетерозиготной b-талас­семии.

 

Таблица 3.

Биохимические показатели крови больных с гетерозиготной b-талассемией (n=84).

Статистические показатели	Показатели крови
	MtHb,%	MtHb-R,	HbA2,%	HbF,%
М	2,823	5,455	4,895	1,928
m	0,226	0,054	0,113	0,150
min	0,92	1,95	2,53	0,21
max	20,1	6,1	8	7,5
p	<0,01	<0,01	<0,01	<0,01
p1	<0,01	<0,01	<0,01	<0,01

Прим.: статистически значимая разница вычислена по W-критерию Уайта:

1.                    p – с контрольными показателями;

2.                    p₂ – с показателями гомозиготной группы.

 

Анализируя полученные данные содержания MtHb и активности MtHb-R, можно предполагать, что количественный дисбаланс глобиновых белков в эрит­роцитах при талассемиях приводит к накоплению в большом количестве актив­ных форм кислорода внутри клетки, которые создают окислительный стресс. При наличии такого окислительного стресса в эритроцитах уве­личи­вается содержание метгемоглобина.

Чрезмерное накопле­ние активных форм кислорода, в свою очередь, при­водит к окислительному повреждению различных макромолекул эритро­цитов, в том числе гемоглобина и мембранных белков.

 

Литература

 

1.                  Аскерова Т.А., Назарли А.Г., Мовсум-заде К.М., Токарев Ю.Н. Постна­таль­ная диагностика гемоглобинопатий и эритроцитарных энзимопатий // Гемато­ло­гия и трансфузиология, 1988, № 2, с. 14-18.

2.                  Аскерова Т.А., Мовсумзаде К.М., Кичибеков Б.Р. Выявление сочетан­ных форм гемоглобино- и энзимопатий у новорожденных // Вопросы меди­цинской химии, 1993, № 6, с. 51-54.

3.                  Герман С.В., Напалкова Н.Н., Колокольникова О.А. О наследственной эн­зи­­мопенической метгемоглобинемии // Клиническая медицина, 1997, № 10, с. 94-95.

4.                  Гребенев А.Л., Бокерило А., Бурков С.Г. Метгемоглобинемия после при­е­ма анестезии // Клиническая фармакология и терапия, 1993, № 2, с. 47-48.

5.                  Ильинская И.Н., Токарев Ю.Н., Беляев В.В., Дервиз Г.В. Гетерогенность наследственных метгемоглобинемий / I Всесоюзный съезд гематологов и трансфузиологов. М.: 1979, с. 203.

6.                  Мовсум-заде К.М., Ахундова А.И., Расулов Э.М. Сочетание генетически различных эритроцитарных нарушений b-талассемии с аномалиями струк­тур HbS и дефицитом Г-6-ФД // Известия АН Азербайджанской ССР, Серия Биологических наук, 1986, № 1, с. 110-116.

7.                  Betke K., Merbi H., Schicht J. Estimation of small percentages of fetal hemo­globin // Nature, 1959, 184, p. 1877-1880.

8.                  Marengo-Rove A.J. Rapid electrophoresis and quantitation of haemoglobins on cellulose acetate // J. Clin. Pathol. 1965, v. 18, p. 790-792.

9.                  Jamal A. Hereditary methemoglobinemia // J. CoU Physieians Surg Pak, 2006, 16(2), p. 157-159.

10.              Jeffrey Black. Isoelectrifocusing in agarose gel for detection and identification of haemoglobin variants // Haemoglobin, 1984, v.8, N 2, p. 117-127.

 

Поступила в редакцию 05.02.2010 г.