Токсикологическая оценка лимонеола и ферусинола на фоне хронического эксперимента у интактных животных

 

Toxicological evaluation of limoneol and ferusinol against the backdrop of chronic experiment in intact animals

 

Холов Абдулхаким Кувватович,

кандидат биологических наук, Государственный научно-исследовательский институт питания Министерства энергетики и промышленности Республики Таджикистан.

 

В данной статье даны результаты токсикологического исследования лимонеола и ферусинола в дозах 0,06-0,08 г/кг массы тела при хроническом эксперименте на кроликах гигантах. Исследования показали, что испытуемые препараты при внутрижелудочном введении в течении 3-х месяцев не оказывают отрицательное влияние на функции органов и систем. Показатели маркеров цитолитического синдрома, холестерина, билирубина общего белка и гематологические показатели крови опытных и контрольных животных почти не отличались, что свидетельствует о безвредности испытуемых веществ на фоне хронического эксперимента.

Ключевые слова: токсичность, хронический, общий белок, билирубин, креатинин, гематологический, синдром, кролики, исследований.

 

In this article the results of toxicological studies limoneol and ferusinol in doses -0.08 0.06 g/kg body weight in chronic experiments on gigants rabbits. Studies have shown that test subjects for drugs severe intraventricular introduction during the 3-month does not have a negative influence on the function of organs and systems. Indicators of markers of citolitic syndrome, cholesterol, bilirubin total protein and blood haematological indices experienced and control animals almost did not differ, suggesting that the tested substances and through which you can to recommendid to the clinical testing.

Keywords: toxicity, chronic, total protein, bilirubin, creatinine, hematology, syndrome, rabbits, research.

 

Актуальность

 

Безопасность лекарственных средств является одной из актуальных проблем современности. Эффективность нового препарата проверяется во время клинических испытаний, а токсичность его можно оценить только в экспериментах на животных (1, 2). Чрезвычайно важна объективная оценка степени безопасности лекарственного препарата, впервые назначаемого человеку. Поэтому при решении проблем доклинической оценки безопасности особенно актуален анализ информации о безопасности всех компонентов лекарственного препарата, такой оценке подлежит не только действующее начало, но и вспомогательные вещества, входящие в лекарственную форму (3, 4).

Длительное введение веществ, обладающих токсическими свойствами, может оказать нефротоксическое, гепатотоксическое действие. Безопасность современной лекарственной терапии в большой степени зависит от адекватности оценки риска токсикологического взаимодействия лекарственных препаратов, поскольку персонализированная фармакотерапия в подавляющем большинстве клинических случаев является комбинированной (5, 6).

Установлено, что при решении проблем доклинической оценки безопасности лекарственных средств ,особенно актуален анализ информации о безопасности всех компонентов (6).

Целью настоящего исследования явилось изучение хронической токсичности различных доз лимонеола и ферусинола в эксперименте.

 

Материалы и методы исследования

 

Исследования проводились на 48 кроликах гигантах начальной массой 1900-2060 г. Подопытные животные были распределены на 5 групп по 8-10 животных: 1-интактные (контроль): 2,3-животные получавшие внутрижелудочно лимонеол в дозе 0,06-0,08 г/кг массы и 4,5- животные получавшие по вышеуказанной схеме ферусинол в дозе 0,06-0,08 г/кг массы в течении 3 месяцев.

Концентрацию общего белка в сыворотке крови определяли по биуретовой реакции по В.В. Меньшикову (1987). Общие липиды (Г.Р. Томсон, 1991) и триглицериды – с помощью биолатестов Cemapol- (Чехия). Активность аспартат- и аланинаминотрансфераз, а также щелочной фосфатазы определяли при помощи биолатестов фирмы Вауер. Содержание общего холестерина определяли при помощи биолатеста Herbos Diagnostica. Количество альбумина определяли при помощи биолатеста Herbos Diagnostica.

Активность АлАТ, АсАТ и ЩФ – при помощи биолатестов фирмы «HerbosDiagnostica»; Содержание билирубина и кретинина – при помощи биолатеста фирмы Вауер. Влияние испытуемых веществ на диурез в хроническом эксперименте методу Саргина (1938).

 

Результаты и их обсуждение

 

Установлено, что в условиях хронического внутрижелудочного введение лимонеола и ферусинола в дозах 0,06 и 0,08 г/кг не оказывали отрицательного влияния на общее состояние и поведенческие реакции кроликов. Животные имели гладкий шерстный покров, охотно поедали корм, сохраняли обычную двигательную активность.

При изучении динамики массы тела животных, получавших препарат лимонеол и ферусинол, обнаружен относительно ровный прирост во все периоды измерений. Вместе с тем по сравнению с контрольной группой у подопытных кроликов прирост массы тела был выше вплоть до окончания 3-месячного курса введения модельной смеси. Через 3 месяца от начала эксперимента масса тела подопытных кроликов в серии получавших лимонеол, по сравнению с контрольными животными увеличилась в среднем на 29%, а у получавших ферусинол не отличалось от контрольных. Через один месяц после отмены введения препаратов, темпы прироста массы тела у подопытных крыс были практически нивелированы до уровня контрольных значений (табл. 1.).

 

Таблица 1.

Прибавка массы тела кроликов (% к исходной) при 1- и 3-месячном внутрижелудочном введении лимонеола и ферусинола (n=8).

Группа крыс, доза	Период наблюдения
	Фон	1 мес	2 мес.		3 мес
Контроль Лимонеол, 0,06 г/кг Лимонеол, 0,08 г/кг Ферусинол, 0,06 г/кг Ферусинол, 0,08 г/кг	1950,0±7,5 1955 0±8,6 1980,0±7,9 2001,0±9,9 2006,0±7,7	2440,1±11,9 2350,8±7,3 2320,2±8,3 2322,2±9,3 2380,3±8,8		2620,1±8,9 2750,8±9,3 2720,7±8,3 2629,2±10,3 2780,3±7,8	2880,2±13,0 2920,0±11,1 2985,2±10,4 2887,7±9,4 2839,6±10,7

 

Лимонеол и ферусинол в указанных дозах не оказывали повреждающего воздействия на систему крови, функциональное состояние печени, почек, сердечно сосудистую систему и ЦНС.

Влияние лимонеола и ферусинола на функциональную функцию печени оценивалось посредством воздействия на антитоксическую и экскреторную функции печени в условиях хронической токсичности по продолжитель- ности гексеналового сна и бромсульфалеиновой пробы (табл. 2).

 

Таблица 2.

Влияние лимонеола и ферусинола на антитоксическую и экскреторную функции печени в хроническом эксперименте на кроликах (n=25-30).

Группа кроликов, доза	Антитоксич. функция печени	Экскреторная функция печени
		Бромсульфалеинов. проба через
	Гексонал, 40 мг/кг	10 мин	30 мин
Контроль Лимонеол, 0,06 г/кг Лимонеол, 0,08 г/кг. Ферусинол, 0,06 г/кг Ферусинол, 0,08 г/кг	45,0±1,2 45,6±2,5 46,9±3,2 45,5±1,2 47,4±3,1	8,4±0,4 8,5±0,2 8,7±0,2 8,4±0,2 8,6±0,4	7,6±0,2 7,0±0,7 7,4±0,3 7,2±0,8  7,6±0,9

 

Установлено, что у животных, получавших препараты эфирных масел в вышеуказанных дозах в течение 3 мес., продолжительность гексеналового сна не отличалась от такового, животных контрольной серии. Проведенные исследования показали, что внутрижелудочное введение препаратов в течение 3 мес. не угнетала антитоксическую и экскреторную функции печени у подопытных животных. Полученные результаты указывают на отсутствие гепатотоксического эффекта при длительном внутрижелудочном введении испытуемых веществ.

Влияние различных доз лимонеола и ферусинола на процесс мочевыделения изучено на 24 кроликах массой 1,8-2,0 кг по методу Саргина (1938). Животные были разделены на следующие группы: 1. контроль; 2 и 3. животные, которым за 40 мин до водной нагрузки вводили препараты эфирных масел внутрь в дозах 0,06 и 0,08 г/кг массы (табл. 3).

Согласно полученным данным, у контрольных кроликов за 6 ч в среднем выделилось до 72% введенного объема воды. У животных, получавших испытуемые препараты в дозе 0,02 г/кг массы, заметного влияния на диурез не было, а у животных, получавших лимонеол и ферусинол в дозах 0,06 и 0,08 г/кг массы, заметно повышался диурез и через 6 ч. от начала водной нагрузки, общий объем мочи у кроликов, получавших испытуемые препараты в течении трех месяцев увеличился до 121-127% соответственно и в дозе 0,08 г/кг – до 124-129% соответственно.

Реакция мочи у контрольных кроликов и подопытных животных во всех случаях оставалась без изменений; рН мочи было в пределах 6,0-6,9. При микроскопическом исследовании мочи контрольных и подопытных кроликов патологических изменений не было выявлено.

 

Таблица 3.

Влияние лимонеола, и ферусинола на показатели диуреза у кроликов при длительном введении (n=10-20).

Группа кроликов, доза,	Время, ч	Показатели диуреза после водной нагрузки, мл%
		Среднее кол-во мочи, мл	В % по отношению к водной нагрузке	рН мочи
Через 1 мес.
Контроль Лимонеол, 0,06 г/кг Лимонеол, 0,08 г/кг Ферусинол, 0,06 г/кг Ферусинол, 0,08 г/кг	6 6 6 6 6	92,0±2,3 119,8±2,9 126,8±3,0 122,8±3,0 130,5±2,7	72 121 126 118 132	5,6±0,3 6,0±0,1 5,9±0,5 5,8±0,5 5,9±0,2
Через 3 мес.
Контроль Лимонеол, 0,06 г/кг Лимонеол, 0,08 г/кг Ферусинол, 0,06 г/кг Ферусинол, 0,08 г/кг	6 6 6 6 6	90,0±1,2 119,8±3,5 127,0±1,2 121,8±3,5 128,8±3,5	70 121  124 127 129	6,0±0,1 6,1±0,7 6,0±0,9 6,0±0,4 6,6±0,2

 

Полученные результаты свидетельствуют о том, что исследуемые препараты не оказывают заметного влияния на диурез кроликов и лишь в больших дозах обладают значительным диуретическим эффектом, при этом не оказывая нефротоксического воздействия.

На протяжении хронического эксперимента (при внутрижелудочном введении испытуемых препаратов в течение 1 и 3 мес.) не было установлено статистически значимых различий в количестве эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов и гемоглобина.

 

Таблица 3.

Гематологические показатели у крыс при внутрижелудочном введении лимонеола и ферусинола в течение 1 и 3 мес (n=6).

Группа крыс, доза	Фон	1 мес	3 мес
	Эритроциты, 10¹²/л
Контроль Лимонеол, 0,06 г/кг Лимонеол, 0,08 г/кг Ферусинол, 0,06 г/кг Ферусинол, 0,08 г/кг	6,2±0,4	6,3±0,4 6,4±0,3 6,6±0,1 6,4±0,3 6,6±0,1	6,3±0,2 6,4±0,3 6,6±0,1 6,4±0,3 6,6±0,1
	Лейкоциты, 109/л
Контроль Лимонеол, 0,06 г/кг Лимонеол, 0,08 г/кг Ферусинол, 0,06 г/кг Ферусинол, 0,06 г/кг	8,0±0,7	8,2±0,3 8,2±0,3 8,3±0,6 8,3±0,6 8,0±0,1	8,7±0,1 9,2±0,3 9,3±0,6 10,3±0,6  9,0±0,1
	Тромбоциты, 109/л
Контроль Лимонеол, 0,06 г/кг Лимонеол, 0,08 г/кг Ферусинол, 0,06 г/кг Ферусинол, 0,08 г/кг	604±29	602±25 602±23 603±26  606±29  609±32	605±27 602±29 604±23 607±33 606±32
	Гемоглобин, г/л
Контроль Лимонеол, 0,06 г/кг Лимонеол, 0,08 г/кг Ферусинол, 0,06 г/кг Ферусинол, 0,08 г/кг	114,5±8,0	113±4  113±4 112±3 115±9 114±3	115±3 115±4 114±8 117±7 115±6

 

Испытуемые средства при внутрижелудочном введении в испытанных дозах не вызывали существенных изменений в уровне общего белка и билирубина сыворотки крови, что указывает на стабильность белковообразующей функции печени и обмена билирубина (табл. 4).

Для выяснения гепатотоксического воздействия испытуемых веществ на печень исследовали их влияние на активность маркеров цитолитического синдрома: аспартат-и аланинаминотрансфераз,а также щелочной фосфатазы (табл. 5).

 

Таблица 4.

Содержание общего белка сыворотки крови крыс при 1- и 3-месячном введении лимонеола и ферусинола (n=6).

Группа крыс, доза	Срок после введения
	Фон	1 мес	3 мес
Общий белок, г/л
Контроль Лимонеол, 0,06 г/кг Лимонеол, 0,08 г/кг Ферусинол, 0,06 г/кг Ферусинол, 0,08 г/	64,6±1,8	65,2±2,4 64,6±5,8 66,9±3,9 64,9±5,9 65,5±7,2	65,0±4,6 65,8±6,6  67,3±2,6  66,8±2,6  67,0±7,7
Билирубин, мкмоль/л
Контроль Лимонеол, 0,06 г/кг Лимонеол, 0,08 г/кг Ферусинол, 0,06 г/кг Ферусинол, 0,0 8 г/	8,24±0,51	8,24±0,31 8,25±0,98 8,33±0,75 8,35±1,37 8,25±1,10	8,25±0,85 8,24±0,75 8,21±1,15 8,26±1,10 8,28±0, 9

 

При этом показатели активности указанных ферментов сыворотки крови у контрольных и опытных животных получавших лимонеол и ферусинол в дозах 0,06 и 0,08 г/кг, не отличались друг от друга и соответствовали норме, характерной для данного вида лабораторных животных (табл. 5).

Полученные результаты свидетельствуют о том, что все испытуемые препараты при длительном введении даже в больших дозах не обладают гепатотоксическими свойствами.

 

 Таблица 5.

 Активность ферментов сыворотки крови крыс при 1 -и 3-месячном введении лимонеола и ферусинола (n=6).

Группа крыс, доза	Срок после введения
	Фон	1 мес	3 мес
Щелочная фосфатаза, ед.
Контроль Лимонеол, 0,06 г/кг Лимонеол, 0,08 г/кг Ферусинол, 0,06 г/кг Ферусинол, 0,08 г/	609,9±34,8	606,4±42,4 613,4±35,4 612,9±45,8 611,9±35,8 614,7±36,5	610,0±32,8 616,4±45,4 618,9±25,8 618,9±25,8 616,7±32,3
Аланинаминотрансфераза, ммоль/с.л
Контроль Лимонеол, 0,06 г/кг Лимонеол, 0,08 г/кг Ферусинол, 0,06 г/кг Ферусинол, 0,08 г/кг	62,81±5,60	63,81±4,23 63,81±4,23 63,8±5,22 62,8±5,22 63,0±5,86	64,08±5,27 63,70±4,23 65,60±5,22 65,80±5,22 67,40±5,86
Аспартатаминотрансфераза, ммоль/с.л
Контроль Лимонеол, 0,06 г/кг Лимонеол, 0,08 г/кг Ферусинол, 0,06 г/кг Ферусинол, 0,08 г/к	103,61±9,23	104,00±9,41 103,80±9,41 105,60±4,63 107,22±9,26 104,26±8,00	104,10±8,48 106,48±8,48 107,22±9,26 107,22±7,26 105,70±8,16

 

При изучении воздействия испытуемых средств на показатели липидного обмена (холестерина и триглицеридов) сыворотки крови, было установлено, что на протяжении всего хронического эксперимента отрицательных изменений их уровня не отмечалось (табл. 6).

 

Таблица 6.

Содержание общего холестерина и триглицеридов, мочевины и креатинина сыворотки крови крыс при 1- и 3-месячном введении лимонеола и ферусинола (n=6).

Группа крыс, доза	Срок после введения
	Фон	1мес	3 мес
Общий холестерин, ммоль/л
Контроль Лимонеол, 0,06 г/кг Лимонеол, 0,08 г/кг Ферусинол, 0,06 г/кг Ферусинол, 0,06 г/кг	2,0±0,1	2,0±0,1 2,1±0,2 1,8±0,1 1,8±0,1 1,9±0,1	2,1±0,1 1,7±0,1 1,8±0,1 1,8±0,1 1,8±0,1
Триглицериды, ммоль/л
Контроль Лимонеол, 0,06 г/кг Лимонеол, 0,08 г/кг Ферусинол, 0,06 г/кг Ферусинол, 0,08 г/кг	0,7±0,02	0,7±0,03 0,6±0,02 0,7±0,04 0,7±0,02 0,7±0,04	0,7±0,03 0,7±0,02 0,7±0,04 0,7±0,02 0,7±0,4
Мочевина, ммоль/л
Контроль Лимонеол, 0,06 г/кг Лимонеол, 0,08 г/кг Ферусинол, 0,06 г/кг Ферусинол, 0,08 г/кг	10,2±0,3	10,7±0,3 10,1±0,3 10,2±0,4 10,2±0,4 10,9±0,2	10,1±0,7 10,7±0,5 11,2±0,9 10,4±0,6 11,9±0,3
Креатинин, ммоль/л
Контроль Лимонеол, 0,06 г/кг Лимонеол, 0,08 г/кг Ферусинол, 0,06 г/кг Ферусинол, 0,08 г/кг	47,6±3,4	48,7±4,2 47,6±6,1 48,7±4,2 49,0±6,1 48,7±4,2	46,1±5,2  49,2±6,4 49,1±6,2  51,1±6,4  49,1±9,2

 

Для выяснения характера токсического влияния препарата на экскреторную функцию почек нами было изучено влияние лимонеола ферусинола на уровень мочевины и креатинина крови.

Показано, что в сыворотке крови кроликов, подвергавшихся воздействию лимонеола и ферусинола в дозах 0,06 и 0,08 г/кг в течении трех месяцев, изменения уровня мочевины и креатинина отсутствуют, что позволяет сделать вывод, об отсутствии повреждающего действия препаратов на экскреторную функцию почек подопытных животных (табл. 6).

 

Заключение

 

Таким образом, результаты проведенных многочисленных экспериментальных исследований убедительно доказывают, что новые лекарственные средства лимонеол и ферусинол, разработанные на основе лимонного и ферулового эфирных масел, являются малотоксичными средствами. Доказано, что при длительном внутрижелудочном введении в больших дозах они не оказывают токсического и повреждающего действии на функции органов и систем, а также не нарушают нормальный обмен основных факторов внутренней среды организма (белков, ферментов, липидов) на фоне хронического эксперимента.

 

Литература

 

1.                  Беленький М.Л. Элементы количественной оценки фармакологического эффекта. – Рига: Изд-во АНЛатвССР, 1959. – 115 с.

2.                  Гуськова Т.А. Доклинические токсикологические исследования лекарственных средств как основа их безопасного применения в клинике.- Клиническеие исследования лекарственных средств в России.- 2004.-№ 3-4.- С 8-15.

3.                  Гуськова Т.А., Терешкина И. Проблемы доклинической оценки безопасности компонентов готовых лекарственных форм // Фармация.-2007.-№5.-С 4-6.

4.                  Крепкова Л.В. и соавт. Токсикологическое изучение гипорамина.-V Росснацконгресс «Человек и лекарство».- М-1988.- с.580.

5.                  Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / под ред. Р.У. Хабриева. – М.: Медицина, 2005. – С. 832.

6.                  Сюбаев Р.Д. Принципы доклинической оценки риска токсикологического взаимодействия лекарственных средств и критерии безопасности комбинированной фармакотерапии.- автореф. дисс. доктора мед. наук.- М.: 2012.- 48 с.

 

Поступила в редакцию 23.08.2013 г.